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詳細說明梯度PCR的梯度溫度控制

發表時間:2022-05-17  |  點擊率:72
  梯度溫度控制是幫助用戶進行梯度PCR優化實驗的特性之一,以便確定PCR實驗方案的溫度和保持時間,盡量減少實驗次數。在理論上,梯度應在均勻的金屬加熱模塊上顯示線性溫度斜率。
  
  然而,傳統PCR儀通常只采用單一的熱模塊并通過位于兩端的兩個加熱及冷卻元件進行溫度的控制。該設計經常會導致以下限制:
  
  1、僅能設置兩個溫度:在熱模塊的兩端設置引物退火的高、低極限溫度。因此,無法在模塊間實現其他區域溫度的精準設置。
  

梯度PCR

 

  2、由于不同列之間的熱學相互作用,模塊上不同區域之間的溫度更可能遵循的是S形的曲線變化而非正的線性梯度。
  
  因為加熱模塊的設計,僅能設置兩個溫度:在熱模塊的兩端設置成引物退火的高、低極限溫度。兩個溫度點的設置是基于計算出來的退火溫度(Tm)和不同列之間期望實現的溫度差異。
  
  VeriFlex技術,可實現更好的引物退火溫度控制。該技術的一種形式便是設計帶有三個或更多分割金屬模塊的梯度PCR儀,每一模塊都具有獨立的加熱和冷卻元件。相比于梯度模塊,該模塊設計可帶來:
  
  1、獨立設置3或6個不同溫度的能力,以便使得每個獨立的區域都能進行更好的溫度控制,特別是在梯度優化過程中。
  
  2、獨立金屬模塊的絕熱性阻止了模塊之間的熱交換。這就可實現更為精準的模塊溫度控制,確保模塊之間實現線性的溫度變化。
  
  因此,選擇能夠精準進行梯度溫度控制的梯度PCR儀將大大節省優化所需時間,找到退火溫度和時間,并確保在梯度模式下優化的條件在正常模式下也能獲得相同的結果。
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